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口蹄疫病毒检测试剂盒

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品牌: 大有泰莱
规格: 48头份
保存期及贮藏条件: 本产品-20℃避光可保存12个月
单价: 2000.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 500 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 北京
有效期至: 长期有效
最后更新: 2021-03-31 19:33
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公司基本资料信息
详细说明
       规格:48头份

介绍:口蹄疫(Foot and Mouth Disease ,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种高度接触性传染病,对易感的偶蹄动物具有严重的潜在经济危害。其特征是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房发生水泡,并溃烂形成烂斑。世界卫生组织(OIE)将其列为必须通报疾病。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种明录》将其列为一类动物疫病。

用途:该试剂盒用于对FMDV进行检测,有助于对FMDV的实验室诊断、监测和流行病调查。

原理:本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ,结合Taqman技术,对特异核酸进行定性或定量检测。

试剂盒的组成

试剂名称

数量

FMD反应液

550μL×1管

FMD酶

40μL×1管

FMD引物探针

120μL×1管

无核酸水

1000μL×1管

FMD阴性对照

50μL×1管

FMD阳性对照

50μL×1管

保存期及贮藏条件:本产品-20℃避光可保存12个月。

样品收集,操作和储存

1. 最好选择发病早期,无菌采样并立即送往实验室进行病毒检测。

2. 样品短期可在4℃冷藏保存,较长时间保存应在--20℃或者-70℃,并且避免反复冻融。

检测步骤

1.核酸提取

样品进行适当处理后,可采用本公司的核酸提取试剂盒,该试剂盒可用于对样本中病毒RNA的提取,请按照提取试剂盒说明书进行操作。也可选择其他合适的商品化产品。

2.扩增试剂的准备

将样品数+1份阴性对照+1份阳性对照设为N,计算试剂所需量,反应体系配制见下表

试剂名称

N份用量(20μL 体系

FMD反应液

10μL×(N+1)

FMD酶

0.5μL×(N+1)

FMD引物探针

1.8μL×(N+1)

无核酸水

5.7μL×(N+1)

将各试剂按照表中用量加入无菌离心管中,充分混匀,短暂离心后在PCR反应管中分别加入18μL混合液。

 

 

3.加样

将制备好的样本,阴性对照,阳性对照各取2μL分别加入对应反应管中,加完后盖紧PCR反应管盖,置于PCR仪上。

4.荧光PCR扩增与信号收集

循环数

温度(

时间

数据收集位点

1

45

15min

-

1

95

2min

-

40

95

15s

-

 

60

1min

数据收集

 

 

注:报告基团选FAM,淬灭基团选NONE。

 

结果成立原则

阳性对照:CT值<30并有明显的扩增曲线。

阴性对照:无CT值或者CT值>37,线性为直线或者轻微斜线,无明显扩增曲线。

以上要求需同时满足,否则本次实验无效,需要重新进行。

 

结果判定

CT值

样本检测结果

<30并有明显的扩增曲线

阳性,样本中检测出FMDV。

30-37

可疑,需重复检测。若第二次检测CT值仍为30-37并有明显扩增曲线则判定为阳性,否则为阴性。

>37并无扩增曲线

阴性,样本中未检测出FMDV。

 

注意事项

1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制,整个实验过程严格控制污染。

2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。

3.使用不含荧光物质的一次性手套,一次性离心管。

4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒应在5次内用完.

5.-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化,液体融化后需彻底混匀,2000 rpm离心15 s ,使用后立即放回-20 ℃。

6.在RNA提取过程中,避免RNA酶污染,尽量缩短操作时间。

7.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。

8.PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。

9.不同批次的试剂盒勿混用。


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